2019-01-29

菌落總數測定

GB 4789.2-2010 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 菌落總數測定

錄入時間:2010-4-28 9:02:54 來源:國家衛生部

前言
 本標準代替GB/T 4789.2-2008《食品衛生微生物學檢驗  菌落總數測定》。
 本標準與GB/T 4789.2-2008相比,主要修改如下:
 ——修改了標準的中英文名稱;
 ——修改了菌落總數計算公式中的解釋;
 ——修改了培養基和試劑;
 ——刪除了第二法    菌落總數Petrifilm TM測試片法。
 本標準的附錄A是規范性附錄。
 GB 4789.2-2010所代替標準的歷次版本發布情況為:
 ——GB 4789.2-1984、GB 4789.2-1994、GB/T 4789.2-2003、GB/T 4789.2-2008。

食品安全國家標準
     食品微生物學檢驗    菌落總數測定
     1  范圍
     本標準規定了食品中菌落總數(Aerobic plate count)的測定方法。
     本標準適用于食品中菌落總數的測定。
     2   術語和定義
     2.1    菌落總數  aerobic  plate  count
     食品檢樣經過處理,在一定條件下(如培養基、培養溫度和培養時間等)培養后,所得每g(mL) 檢樣中形成的微生物菌落總數。
     3   設備和材料
     除微生物實驗室常規滅菌及培養設備外,其他設備和材料如下:
     3.1    恒溫培養箱:36 ℃±1 ℃,30 ℃±1 ℃。
     3.2    冰箱:2 ℃~5 ℃。
     3.3    恒溫水浴箱:46 ℃±1 ℃。
     3.4    天平:感量為 0.1 g。
     3.5    均質器。
     3.6    振蕩器。
     3.7    無菌吸管:1 mL(具 0.01 mL 刻度)、10 mL(具 0.1 mL 刻度)或微量移液器及吸頭。
     3.8    無菌錐形瓶:容量 250 mL、500 mL。
     3.9    無菌培養皿:直徑 90 mm。
     3.10    pH 計或 pH 比色管或精密 pH 試紙。
     3.11    放大鏡或/和菌落計數器。
     4    培養基和試劑
     4.1    平板計數瓊脂培養基:見附錄 A 中 A.1。
     4.2    磷酸鹽緩沖液:見附錄 A 中 A.2。
     4.3    無菌生理鹽水:見附錄 A 中 A.3。
     5    檢驗程序
     菌落總數的檢驗程序見圖1。

菌落總數的檢驗程序

6    操作步驟
     6.1    樣品的稀釋
     6.1.1    固體和半固體樣品:稱取 25 g 樣品置盛有 225 mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質杯內,8000 r/min~10000 r/min 均質 1 min~2 min,或放入盛有 225 mL 稀釋液的無菌均質袋中,用拍擊式均 質器拍打 1 min~2 min,制成 1:10 的樣品勻液。
     6.1.2    液體樣品:以無菌吸管吸取 25 mL 樣品置盛有 225 mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶 (瓶內預置適當數量的無菌玻璃珠)中,充分混勻,制成 1:10 的樣品勻液。
     6.1.3    用 1 mL 無菌吸管或微量移液器吸取 1:10 樣品勻液 1 mL,沿管壁緩慢注于盛有 9 mL 稀釋液的 無菌試管中(注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面),振搖試管或換用 1 支無菌吸管反復吹打使其混 合均勻,制成 1:100 的樣品勻液。
     6.1.4    按 6.1.3 操作程序,制備 10 倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次,換用 1 次 1 mL 無菌吸管 或吸頭。
     6.1.5    根據對樣品污染狀況的估計,選擇 2 個~3 個適宜稀釋度的樣品勻液(液體樣品可包括原液),在進行 10 倍遞增稀釋時,吸取 1 mL 樣品勻液于無菌平皿內,每個稀釋度做兩個平皿。同時,分別吸 取 1 mL 空白稀釋液加入兩個無菌平皿內作空白對照。
     6.1.6    及時將 15 mL~20 mL 冷卻至 46 ℃的平板計數瓊脂培養基(可放置于 46 ℃±1 ℃恒溫水浴箱中 保溫)傾注平皿,并轉動平皿使其混合均勻。
     6.2    培養
     6.2.1    待瓊脂凝固后,將平板翻轉,36 ℃±1 ℃培養 48 h±2 h。水產品 30 ℃±1 ℃培養 72 h±3 h。
     6.2.2    如果樣品中可能含有在瓊脂培養基表面彌漫生長的菌落時,可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層 瓊脂培養基(約 4 mL),凝固后翻轉平板,按 6.2.1 條件進行培養。
     6.3    菌落計數
     可用肉眼觀察,必要時用放大鏡或菌落計數器,記錄稀釋倍數和相應的菌落數量。菌落計數以菌落形成單位(colony-forming units,CFU)表示。
     6.3.1    選取菌落數在 30 CFU~300 CFU 之間、無蔓延菌落生長的平板計數菌落總數。低于 30 CFU 的 平板記錄具體菌落數,大于 300 CFU 的可記錄為多不可計。每個稀釋度的菌落數應采用兩個平板的平均數。
     6.3.2    其中一個平板有較大片狀菌落生長時,則不宜采用,而應以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋 度的菌落數;若片狀菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均勻,即可計算半個平板后乘以 2,代表一個平板菌落數。
     6.3.3    當平板上出現菌落間無明顯界線的鏈狀生長時,則將每條單鏈作為一個菌落計數。
     7    結果與報告
     7.1    菌落總數的計算方法
     7.1.1    若只有一個稀釋度平板上的菌落數在適宜計數范圍內,計算兩個平板菌落數的平均值,再將平均值乘以相應稀釋倍數,作為每 g(mL)樣品中菌落總數結果。
     7.1.2    若有兩個連續稀釋度的平板菌落數在適宜計數范圍內時,按公式(1)計算:

公式
     式中:
     N——樣品中菌落數
     C——平板(含適宜范圍菌落數的平板)菌落數之和;
     n 1——第一稀釋度(低稀釋倍數)平板個數;
     n 2——第二稀釋度(高稀釋倍數)平板個數;
     d——稀釋因子(第一稀釋度)。
     示例:

示例

上述數據按7.2.2數字修約后,表示為25000或2.5×104。
     7.1.3    若所有稀釋度的平板上菌落數均大于 300 CFU,則對稀釋度最高的平板進行計數,其他平板可記錄為多不可計,結果按平均菌落數乘以最高稀釋倍數計算。
     7.1.4    若所有稀釋度的平板菌落數均小于 30 CFU,則應按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。
     7.1.5    若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無菌落生長,則以小于 1 乘以最低稀釋倍數計算。
     7.1.6    若所有稀釋度的平板菌落數均不在 30 CFU~300 CFU 之間,其中一部分小于 30 CFU 或大于 300 CFU 時,則以最接近 30 CFU 或 300 CFU 的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。
     7.2    菌落總數的報告
     7.2.1    菌落數小于 100 CFU 時,按"四舍五入"原則修約,以整數報告。
     7.2.2    菌落數大于或等于 100 CFU 時,第 3 位數字采用"四舍五入"原則修約后,取前 2 位數字,后面用 0 代替位數;也可用 10 的指數形式來表示,按"四舍五入"原則修約后,采用兩位有效數字。
     7.2.3    若所有平板上為蔓延菌落而無法計數,則報告菌落蔓延。
     7.2.4    若空白對照上有菌落生長,則此次檢測結果無效。
     7.2.5    稱重取樣以 CFU/g 為單位報告,體積取樣以 CFU/mL 為單位報告。


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